培养基的保存有哪些注意事项(培养基保存方法长期保存以及短期保存)

本篇文章无忧网将为大家介绍培养基的保存有哪些注意事项(培养基保存方法长期保存以及短期保存)，下面一起来详细了解一下吧。

培养基保存。本发明涉及一种微生物发酵生产有机肥的方法。微生物发酵生产有机肥的方法，包括以下步骤：(1)将含有各种营养元素和有机质的有机肥放入发酵罐中，加入适量的水，搅拌均匀，密封发酵。 2）将发酵好的有机肥放入容器中，在温度控制在20-25的条件下发酵1-2个月，然后取出单独包装。 3）将包装好的有机肥按比例混合均匀，然后装入塑料袋中，密封发酵。

一：培养基的保存 是

培养基是液体、半固体或固体形式的物质，含有天然或合成成分，旨在确保微生物增殖或维持微生物活力。培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的重要环节。培养基本身的质量、是否正确保存、是否配制和使用都会直接影响检测结果的准确性。本文就微生物实验室在培养基的购买、保存、配制、使用等方面应采取的质量控制措施进行探讨，并谈一些看法和看法。希望能够帮助微生物检测的同仁更好地工作。

1、培养基的购买及验收

1. 购买

从培养基本身的质量来看，不同厂家的产品，甚至同一厂家不同批次的产品都会存在差异。根据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》，对介质供应商进行评估后选择合格的供应商是介质采购过程中的重要步骤。应选择产品市场信誉、质量保证能力和服务保证能力较高的企业；企业是否通过质量管理体系认证是一个较为客观的评价指标。

生产企业需提供：培养基成分名称及产品编号、批号、使用前pH值、储存信息及有效期、使用的性能评价及试验菌株、技术数据清单、质量控制证书以及必要的安全/危害数据等材料。

2. 验收

购买的培养基到达后，应由专人做好验收和检查工作，仔细核对厂家提供的信息、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期等是否符合要求。每批培养基到货后均应进行质量检验，符合检验规定要求后方可投入使用。

2、存储介质

干粉介质应存放在阴凉干燥处，避免阳光直射；常温下未开封的介质保质期以厂家规定为准，开瓶后的干粉介质易吸潮，应防潮并尽快用完。

应定期对储存的培养基进行例行检查，例如重新检查容器的密封性、首次开启日期、内容物的感官检查，如果培养基出现结块、颜色异常和其他变质迹象，则不应使用。

3. 培养基的制备

1、培养基水

培养基配制水应使用电阻率不低于300000cm的蒸馏水或同质量的水，最好不要使用离子交换器生产的去离子水。

2. 称重

称量时，使用专用角度勺，避免交叉污染，影响检测结果；干粉介质容易吸潮，如有可能，尽量在湿度较低的房间内称量介质。

3.补液

复水时不要使用铜锅、铁锅，以免离子混入培养基中，影响微生物生长；容器的大小必须是复水后培养基总体积的两倍以上，并避免在加热溶解过程中进行培养。底座溢出；含有琼脂粉的培养基可先浸泡几分钟再加热溶解；加热时必须搅拌培养基，尤其是琼脂培养基。为避免烧焦和沸腾，少量介质最好使用沸水浴。

燃烧介质的营养成分被破坏，并可能产生有毒物质。如果发现焦化，或培养基未溶解均匀就溢出，则该培养基不能使用，应重新配制。重熔琼脂培养基时，用沸水浴或流动蒸汽加热，最多只能加热两次，第二次重熔后未使用的培养基应丢弃。

4. 灭菌

一般培养基采用湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，通常在121，15分钟，含糖或特殊培养基按国家标准或制造商提供的说明书进行灭菌。配制好的培养基必须立即灭菌，避免因微生物的生长繁殖而消耗营养物质，改变培养基的pH值。

高温会破坏培养基的营养成分，也会降低琼脂的凝胶强度，因此必须严格控制灭菌温度和时间，且不能重复灭菌。高压蒸汽灭菌器的压力表应定期校准，灭菌效果应定期用生物指示菌法或化学变色纸验证。

5. pH测量

微生物必须处于合适的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物学特性。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值，即培养基使用前的pH，应在25的温度下用精密pH计测量。固体琼脂培养基应使用特殊的胶体表面电极进行测量。使用过程中，如需调节培养基pH值，可用1mol/L NaOH或1mol/LHCL调节。注意不要反复调整pH值，否则会影响培养基的渗透压。

6. 准备好的培养基的保存

灭菌后，应将培养基迅速冷却至所需温度，避免在灭菌锅内长期保存，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。

所配制的培养基量应在最长保存期内用完。含染料介质应避光保存；如果配制当天浇注的琼脂平板未用完，应冷藏保存。若存放时间超过2天，应装入密封塑料袋中保存；肉汤培养基如果保存时间超过2 周，应放置在螺旋盖试管或其他密封试管或容器中，以防止蒸发。

四、培养基的性能测试

1、外观控制

配制好的培养基应具有相应的颜色，一般培养基应澄清、无混浊、无沉淀。使用前应检查介质的颜色变化和蒸发/脱水情况。

2. 污染控制

每批配制好的培养基选取一部分进行污染试验（空白试验），确认无微生物生长后方可使用。

3、性能测试

试验菌株的选择：试验菌株是一组具有其代表种的稳定特性、能有效证明实验室特定培养基最佳性能的菌株。应来自国际/国家标准菌种保藏中心的ATCC标准菌株或其他经过认证的菌株。拉紧。

(2)定量检验：改良Miles-Misra法。将测试菌株过夜培养物进行10 倍增量稀释；将测试板和参考板分为4个区域并进行标记；从最高稀释度开始，分别滴一滴稀释液于测试板和对照板的标记区域；将整个1/4区域37孵育18小时；计数易于计数的面积，并根据公式计算生长率（生长率=待测培养基平板上获得的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数）。目标细菌在非选择性培养基上的生长速率应不低于0.7，且此类培养基应易于目标细菌的生长；目标细菌在选择性培养基上的生长速率应不低于0.1。

半定量检测：改进的划线接种法。板块分为ABCD四个区域，共画了16条线。平行线间隔约0.5厘米。小于划线一半的生长量记为0分，将各点相加得到生长指数G。目标菌在培养基上应表现出典型的生长，非目标菌的生长应为部分或完全被抑制。当目标菌的生长指数G大于6时，培养基合格。

定性检验：平板接种观察法。用接种环取试验菌培养物，在试验培养基表面画一条平行直线。按标准规定的培养时间和温度培养接种的平板。目标细菌应生长良好并具有典型的菌落外观、大小和形状，非目标细菌应生长弱或不生长。

此外，对于选择性培养基，应选择生长抑制的菌株进行培养基接受。

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二：培养基保存 长期保存以及短期保存

灭菌后可保存在4度冰箱中，一般可保存3个月。

三：培养基保存 短期保存

1、培养基应长期保存，应在2-8避光保存。请勿在低温下结冰。

2、培养基中添加的L-谷氨酰胺不稳定，在溶液中容易分解。如果长期保存后发现细胞生长减慢，可以在使用前添加适量的L-谷氨酰胺，以维持细胞的正常代谢。

3、含有NaHCO3的培养基打开次数较多后，培养基中的CO2会逐渐溢出，pH值上升，培养基颜色变为紫色。碱性培养基会导致细胞生长停滞或死亡，建议分装至小瓶或使用HEPES调节至正常pH范围。

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